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常見的核酸提取方法介紹

釋出時間│··╃◕:2022-08-15      點選次數│··╃◕:1204
核酸作為基因表達的物質基礎₪☁₪₪•,是分子生物學研究的主要物件▩✘。無論是進行核酸的結構還是功能研究₪☁₪₪•,首先都需要對核酸進行提取和純化▩✘。核酸提取為大量廣泛研究和應用提供了基礎▩✘。常見的核酸提取方法有│··╃◕:

1│☁、酚/氯仿抽提法

1956年發明₪☁₪₪•,透過酚/氯仿處理細胞破碎液或者組織勻漿後₪☁₪₪•,在水相中主要溶解以DNA為主的核酸成分₪☁₪₪•,在有機相中主要是脂類物質₪☁₪₪•,蛋白質位於兩相之間▩✘。酚/氯仿抽提的優勢是成本低₪☁₪₪•,對實驗條件要求較低▩✘。提取的DNA保持天然狀態▩✘。獲得的DNA純度高│☁、片段大│☁、效果好₪☁₪₪•,缺點是操作較為繁瑣▩✘。

2│☁、醇沉澱法

乙醇能夠消除核酸的水化層₪☁₪₪•,使帶負電荷的磷酸基團暴露出來₪☁₪₪•,NA﹢等帶正電荷離子能與磷酸基團結合₪☁₪₪•,形成沉澱▩✘。

3│☁、層析柱法

透過特殊矽基質吸附材料₪☁₪₪•,能夠特定吸附DNA₪☁₪₪•,而RNA和蛋白質順利透過₪☁₪₪•,然後利用高鹽低PH結合核酸₪☁₪₪•,低鹽高PH值洗脫₪☁₪₪•,來分離純化核酸▩✘。

4│☁、熱裂解鹼法

鹼法提取主要是利用共價閉合環狀質粒與線性染色質在拓撲學上的差異來分離他們₪☁₪₪•,在鹼性下₪☁₪₪•,變性蛋白是可溶的▩✘。

5│☁、煮沸裂解法

加熱處理DNA溶液₪☁₪₪•,利用線性DNA分子的特性₪☁₪₪•,透過離心將DNA片段與變性蛋白質和細胞碎片形成的沉澱分離▩✘。煮沸裂解法提取DNA₪☁₪₪•,得量少₪☁₪₪•,雜質多₪☁₪₪•,DNA可能會出現斷裂₪☁₪₪•,主要適用於一些粗略的實驗▩✘。

6│☁、奈米磁珠法

運用奈米技術對超順磁性奈米顆粒的表面進行改良和表面修飾後₪☁₪₪•,製備成超順磁性氧化矽奈米磁珠▩✘。該磁珠能在微觀介面上與核酸分子特異性地識別和高效結合▩✘。利用氧化矽奈米微球的超順磁性₪☁₪₪•,在Chaotropic鹽(鹽酸胍│☁、異硫氰酸胍等)和外加磁場的作用下₪☁₪₪•,從血液│☁、動物組織│☁、食品│☁、病原微生物等樣本中分離出DNA和RNA▩✘。

7│☁、濃鹽法│··╃◕:高鹽沉澱法是酚氯仿抽提方法的一個變種₪☁₪₪•,利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同₪☁₪₪•,將二者分離▩✘。優點事省略了酚氯仿抽提操作的麻煩₪☁₪₪•,並且幾乎克服了酚氯仿抽提方法的一切缺點₪☁₪₪•,只是得到DNA的純度不夠穩定▩✘。 
 

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